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恒溫?fù)u床在蛋白質(zhì)免疫反應(yīng)中的應(yīng)用

更新時(shí)間:2019-09-11      點(diǎn)擊次數(shù):4360

恒溫?fù)u床在蛋白質(zhì)免疫反應(yīng)中的應(yīng)用:

① 封閉:將轉(zhuǎn)膜后的PVDF膜浸沒在5%脫脂奶粉封閉液中封閉,搖床 50~60轉(zhuǎn), 2 小時(shí)(室溫)。

② 一抗孵育:根據(jù)抗體說明書選擇適當(dāng)濃度稀釋抗體,將稀釋好的抗體加入抗體孵育盒,并將PVDF膜放入其中,搖床50~60轉(zhuǎn),4℃孵育過夜。次日取出,TBST洗膜(3次/15 min,60轉(zhuǎn))。

③ 二抗孵育:將二抗稀釋為合適的濃度,PVDF膜放入稀釋的二抗工作液中,室溫孵育1小時(shí),搖床80轉(zhuǎn)。孵育結(jié)束后,取出PVDF膜,TBST洗膜(3次/15 min,80轉(zhuǎn))

④ 顯影:吸取適量的化學(xué)發(fā)光試劑A液和B液,等體積混合,均勻加在PVDF膜上,孵育數(shù)十秒,使用凝膠成像系統(tǒng)曝光并獲取圖像。經(jīng)凝膠成像系統(tǒng)測(cè)量條帶灰度值,計(jì)算實(shí)驗(yàn)蛋白的相對(duì)表達(dá)量

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